PCR可以被認(rèn)為是與發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制過程相似的技術(shù)，其結(jié)果都是以原來的DNA為模板產(chǎn)生新的互補(bǔ)DNA片段。細(xì)胞中DNA的復(fù)制是一個(gè)非常復(fù)雜的過程。參與復(fù)制的有多種因素。PCR是在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，基本原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相似，但反應(yīng)體系相對較簡單。
PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：
①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；
②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；
③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈"，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。
熒光PCR如何實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)控的呢？
1、PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料。
2、所有的定量PCR儀器都有三個(gè)共同的組成部分（檢測器、激發(fā)光源、熱循環(huán)模塊）。
3、在擴(kuò)增過程中，熒光信號隨著PCR產(chǎn)物的增加而增強(qiáng)。
4、每個(gè)循環(huán)結(jié)束后，定量PCR儀器通過光學(xué)系統(tǒng)記錄熒光信號的增加。
5、PCR軟件計(jì)算出數(shù)據(jù)，用于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析ARMS檢測方法；1個(gè)SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)雙管反應(yīng)，含目的基因檢測及內(nèi)參檢測雙通道。
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更新時(shí)間：2022-10-13
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