甘油三酯（triglyceride, TG）含量測定試劑盒說明書

                                               微量法100T/96S

注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

TG是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。

測定原理：

用異丙醇提取TG，脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H₂O₂，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505 nm處有特征吸收峰。

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配置：

試劑一：液體120 mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體12 mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體12 mL×1瓶，4℃避光保存。

TG的提取：

1、   組織中TG的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測液。

2、細(xì)胞、細(xì)菌中TG的提取：先收集400-500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測液。

3、血清（漿）樣品：直接測定。

測定操作：

酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到505 nm。

混勻，室溫下靜置20min，于505 nm波長處讀取吸光值，記為A空白和A測定，△A=A測定-A空白。空白管只需測一管。

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.3261x - 0.0199； R² = 0.9979；x：標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL） y：吸光值差值ΔA。

1. 血清（漿）中甘油三酯含量計(jì)算：

TG含量（mg/mL）=（ΔA+0.0199）÷ 0.3261=3.07×（ΔA+0.0199）

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中甘油三酯含量計(jì)算：

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

TG含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.3261×V樣÷(Cpr×V樣）=3.07×（ΔA+0.0199）÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

TG含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.3261×V樣÷(W×V樣÷V樣總）=3.07×（ΔA+0.0199）÷ W

V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入試劑一體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時蓋緊。

2. Z低檢出限為100μg/mL。