果糖（fructose ，FT）含量試劑盒說明書

                                微量法100管/96樣

注   意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

果糖是一種最為常見的己酮糖，是葡萄糖的同分異構體，以游離狀態大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中，能與葡萄糖結合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖，廣泛應用于食品、醫藥、保健品生產中。

測定原理：

果糖與間苯二酚反應，生成有色物質，在480nm下有特征吸收峰。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100ml×1瓶，4℃保存；

試劑一：1mg/mL標準液10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體 25ml×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體 8ml×1瓶， 4℃避光保存；

試劑四：粉劑0.5g×1瓶，常溫保存。

果糖提取：

稱取0.1~0.2g樣本，常溫研碎；加入0.5mL提取液，適當研磨后快速轉移到有蓋離心管中；置于80℃水浴鍋中10min（蓋緊，以防止水分散失），振蕩3~5次，冷卻后，4000g，25℃離心10min，取上清；加入少量（約2mg）試劑四，80℃脫色30min（蓋緊，以防止水分散失）；再加入0.5mL提取液，4000g，25℃離心10min，取上清液測定。

測定步驟：

分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至480nm，蒸餾水調零。

1、  樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，95℃水浴反應30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測定480nm處光吸收值，空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2和A3。空白管和標準管只要做一管。

果糖含量計算：

1、果糖含量(mg/mg prot）=（C標準管×V1）×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷（A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測定蛋白濃度。

2、果糖含量(mg/g鮮重)=(C標準管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。

C標準管：標準管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.03mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：Z低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot