土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）試劑盒說明書

                                         微量法100管/48樣

注    意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：                           

S-NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

測定原理：

S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。

自備用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存；

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

測定步驟：

1、   分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。

2、  加樣表

混勻， 37℃振蕩反應(yīng)1h后，90℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，

10000g 25℃離心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）

充分混勻，室溫靜置2min后， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

S-NAG活力計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.00645x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反總÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10^-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0043x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反總÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10^-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。