土壤β-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase, S-β-XYS）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                                    微量法100T/48S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理：

S-β-XYS催化對(duì)硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚，對(duì)硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰，測(cè)定405nm光吸收增加速率，可計(jì)算S-β-XYS活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

約0.1g鮮土或風(fēng)干土樣，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，室溫振蕩提取30min，然后10000g，4℃，離心10min，取上清待測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、   分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm。

2、   操作表

β-木糖苷酶活性計(jì)算公式：

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=13.226x+0.0011，R²=0.9998；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。

酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯酚的酶量為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.12mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min=1/72d；

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=6.613x+0.0011，R²=0.9998；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA

酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯酚的酶量為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=32.66×(ΔA-0.0011)÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.12mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min=1/72d；

ΔA控制在0.01-1范圍內(nèi)，若ΔA大于1，可適當(dāng)減小樣本量。

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。