直鏈淀粉含量試劑盒說(shuō)明書

                                 微量法100管/96樣

注    意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈，其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

測(cè)定原理：

利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開(kāi)，直鏈淀粉與碘形成的絡(luò)合物在620nm下有吸收峰。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、YI醚和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶；4℃保存；

試劑二：YI醚100mL×1瓶；(自備)

試劑三：液體100mL×1瓶；4℃保存；

試劑四：液體2mL×1瓶；4℃保存；

試劑五：液體300uL×1瓶；4℃保存；

淀粉提取：

稱取0.01~0.02g烘干樣本（建議稱取約0.01g）于研缽中研碎，加入1mL試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑二（YI醚）振蕩5min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑三充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm，蒸餾水調(diào)零。

測(cè)定管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL樣本， 14μL試劑四，120μL蒸餾水，2μL試劑五，44uL蒸餾水，混勻，測(cè)定620nm處吸光值，記為A測(cè)定。

空白管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL試劑三， 14μL試劑四，120μL蒸餾水，2μL試劑五，44μL蒸餾水，混勻，測(cè)定620nm處吸光值，記為A空白。

直鏈淀粉含量計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=1.755x+0.0062；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y= 0.8775x+0.0062；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

Z低檢測(cè)限為1mg/g干重或10μg/mgprot。