植物銨態氮試劑盒說明書

                                                微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

氮素是構成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環包括許多轉化作用。空氣中的氮氣被固氮微生物及植物與微生物的共生體固定成氨態氮，經過硝化微生物的作用轉化成硝態氮，后者被植物或微生物同化成有機氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。

測定原理：

α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經氧化脫氨變成相應的α-酮酸，酮酸進一步脫羧變成醛，水合茚三酮則被還原，在弱酸環境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反應， 縮合生成藍紫色物質，在580nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器：

天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體9mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1.5mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存。

樣本處理：

按照質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室溫勻漿后于25℃，12000g離心10min，取上清待測。

測定操作表：

注意：空白管只需測定一次。

計算公式：

a.      用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.1535x-0.0279，R²=0.9993

NH₄⁺—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反總÷（W×V樣÷V樣總）

               = 32.9×（△A+0.0279）÷W

V反總：反應總體積，0.315mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g

a.        用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0768x-0.0279，R²=0.9993

NH₄⁺—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反總÷（W×V樣÷V樣總）

               = 65.8×（△A+0.0279）÷W

V反總：反應總體積，0.315mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g

注意事項：

1.        提取好的待測液盡快測定，低溫保存不得超過24小時。

2.        沸水浴時間不宜過長，否則會對測定結果有影響。

3.        顯色后20min內完成測定。

4.        Z低檢出限為18μg/g。